સલ્ફોરાફેન શું છે?

સલ્ફોરાફેન એ ફાયટોકેમિકલ છે, જે ઓર્ગેનોસલ્ફર સંયોજનોના આઇસોથિયોસાયનેટ જૂથમાંનો એક પદાર્થ છે, જે ક્રુસિફેરસ શાકભાજીમાં જોવા મળે છે, જેમ કે બ્રોકોલી, કોબી, કોબીજ અને બ્રસેલ્સ સ્પ્રાઉટ્સ. તે બોક ચોય, કાલે, કોલાર્ડ્સ, મસ્ટર્ડ ગ્રીન્સ અને વોટરક્રેસમાં પણ મળી શકે છે. સંશોધન અભ્યાસો દર્શાવે છે કે સલ્ફોરાફેન વિવિધ પ્રકારના કેન્સરને રોકવામાં મદદ કરી શકે છે Nrf2 ના ઉત્પાદનને સક્રિય કરી રહ્યું છે, અથવા ન્યુક્લિયર ફેક્ટર એરિથ્રોઇડ 2-સંબંધિત પરિબળ, એક ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળ જે ઓક્સિડન્ટ્સ પ્રત્યે કોષના પ્રતિભાવને નિયંત્રિત કરતી રક્ષણાત્મક એન્ટીઑકિસડન્ટ પદ્ધતિઓનું નિયમન કરે છે. નીચેના લેખનો હેતુ સલ્ફોરાફેનના કાર્યનું વર્ણન કરવાનો છે.

અમૂર્ત

KEAP1-Nrf2-ARE એન્ટીઑકિસડન્ટ સિસ્ટમ એ મુખ્ય માધ્યમ છે જેના દ્વારા કોષો ઓક્સિડેટીવ અને ઝેનોબાયોટિક તણાવને પ્રતિભાવ આપે છે. સલ્ફોરાફેન (SFN), ક્રુસિફેરસ શાકભાજીમાંથી મેળવવામાં આવેલ ઇલેક્ટ્રોફિલિક આઇસોથિયોસાયનેટ, KEAP1-Nrf2-ARE પાથવેને સક્રિય કરે છે અને રોગોની સારવારમાં રસનું પરમાણુ બની ગયું છે જેમાં ક્રોનિક ઓક્સિડેટીવ તણાવ મુખ્ય ઇટીઓલોજિકલ ભૂમિકા ભજવે છે. અમે અહીં દર્શાવીએ છીએ કે સંસ્કારી, માનવ રેટિના પિગમેન્ટ એપિથેલિયલ (RPE-1) કોષોના માઇટોકોન્ડ્રિયા SFN સાથે સારવાર કરાયેલ હાયપરફ્યુઝનમાંથી પસાર થાય છે જે Nrf2 અને તેના સાયટોપ્લાઝમિક અવરોધક KEAP1 બંનેથી સ્વતંત્ર છે. મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝન એપોપ્ટોસીસ દરમિયાન મિટોકોન્ડ્રીયામાં છિદ્ર રચનાને અટકાવીને સાયટોપ્રોટેક્ટીવ હોવાનું નોંધવામાં આવ્યું છે, અને તેની સાથે સુસંગત, અમે એપોપ્ટોસીસ-પ્રેરક, સ્ટેરોસ્પોરીનના સંપર્કમાં આવેલા SFN-સારવાર કરાયેલ કોષોનું Nrf2-સ્વતંત્ર, સાયટોપ્રોટેક્શન બતાવીએ છીએ. યાંત્રિક રીતે, SFN મિટોકોન્ડ્રિયા અને પેરોક્સિસોમ્સમાં દ્રાવ્ય વિખંડન પરિબળ Drp1 ની ભરતી અને/અથવા રીટેન્શનને ઘટાડે છે પરંતુ એકંદર Drp1 વિપુલતાને અસર કરતું નથી. આ ડેટા દર્શાવે છે કે SFN ના ફાયદાકારક ગુણધર્મો KEAP1-Nrf2-ARE સિસ્ટમના સક્રિયકરણની બહાર વિસ્તરે છે અને બહુવિધ ક્લિનિકલ ટ્રાયલ્સમાં આ એજન્ટનો વર્તમાન ઉપયોગ જોતાં વધુ પૂછપરછની ખાતરી આપે છે.

કીવર્ડ્સ: સલ્ફોરાફેન, Nrf2, Drp1, મિટોકોન્ડ્રિયા, ફિશન, ફ્યુઝન, એપોપ્ટોસીસ

પરિચય

સલ્ફોરાફેન એ મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશનનું Nrf2-સ્વતંત્ર અવરોધક છે

સલ્ફોરાફેન (SFN) એક આઇસોથિયોસાયનેટ સંયોજન છે જે ખોરાકમાં સૌથી સામાન્ય રીતે ક્રુસિફેરસ શાકભાજી [56] માંથી મેળવવામાં આવે છે. તે ક્ષતિગ્રસ્ત કોષોમાંથી હાઇડ્રોલિટીક એન્ઝાઇમ માયરોસિનેઝના વેસીક્યુલર પ્રકાશન દ્વારા શિકારના ઝેનોબાયોટિક પ્રતિભાવ તરીકે છોડમાં ઉત્પન્ન થાય છે; આ એન્ઝાઇમ ગ્લુકોસિનોલેટ્સને આઇસોથિયોસાયન્ટેસમાં રૂપાંતરિત કરે છે [42]. છેલ્લા બે દાયકાઓમાં, SFN તેની જાણ કરવામાં આવેલ કેન્સર વિરોધી, એન્ટીઑકિસડન્ટ અને એન્ટિમાઇક્રોબાયલ ગુણધર્મો [57] માટે વ્યાપકપણે લાક્ષણિકતા ધરાવે છે. આમાંની મોટાભાગની અસરકારકતા KEAP1-Nrf2-એન્ટીઑકિસડન્ટ રિસ્પોન્સ એલિમેન્ટ (ARE) સિગ્નલિંગ પાથવેને મોડ્યુલેટ કરવા માટે SFN ની ક્ષમતાને આભારી છે, જો કે સંયોજનની વધારાની પ્રવૃત્તિઓ ઓળખવામાં આવી છે, જેમાં હિસ્ટોન ડીસીટીલેઝ પ્રવૃત્તિના અવરોધ અને કોષ ચક્રની પ્રગતિનો સમાવેશ થાય છે. 29]. Nrf2 એ મુખ્ય એન્ટીઑકિસડન્ટ ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળ છે અને હોમિયોસ્ટેસિસની સ્થિતિમાં, તેની સ્થિરતા સાયટોપ્લાઝમિક Cullin3KEAP1 ubiquitin ligase કોમ્પ્લેક્સ [20] ની ક્રિયા દ્વારા દબાવવામાં આવે છે. ખાસ કરીને, Nrf2 ને ડાયમેરિક સબસ્ટ્રેટ એડેપ્ટર KEAP3 સાથે બંધાઈને Cullin1KEAP1 ligase માં ભરતી કરવામાં આવે છે અને ત્યારબાદ પોલીયુબ ચેઈન સાથે સંશોધિત કરવામાં આવે છે જે પ્રોટીઝોમ-મધ્યસ્થી ડિગ્રેડેશન માટે ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળને લક્ષ્ય બનાવે છે. આ રચનાત્મક ટર્નઓવર અનસ્ટ્રેસ્ડ કોષોમાં Nrf2 ના અર્ધ જીવનને ~15 મિનિટ [30], [33], [46], [55] સુધી મર્યાદિત કરે છે. અસંખ્ય પ્રકારના તાણના પ્રતિભાવમાં, ખાસ કરીને ઓક્સિડેટીવ સ્ટ્રેસ, KEAP1, એક સિસ્ટીન-સમૃદ્ધ પ્રોટીન, રેડોક્સ સેન્સર તરીકે કામ કરે છે, અને KEAP151 ના ક્રિટિકલ સિસ્ટીનનું ઓક્સિડેટીવ ફેરફાર, ખાસ કરીને C1, Nrf2-KEAP1 ને CUL3 થી અલગ કરે છે, જેનાથી Nrf2-KEAP8 ને CUL20 થી અલગ કરવામાં આવે છે. 55], [2], [151]. નોંધનીય રીતે, SFN અને સંભવતઃ અન્ય Nrf1 એક્ટિવેટર્સ, KEAP21 ના C2 માં ફેરફાર કરીને ઓક્સિડેટીવ તણાવની નકલ કરે છે દા.ત. [2]. Nrf19 નું સ્થિરીકરણ તેના ન્યુક્લિયસમાં સ્થાનાંતરણ માટે પરવાનગી આપે છે જ્યાં તે તબક્કા II એન્ટીઑકિસડન્ટ અને ડિટોક્સિફિકેશન જનીનોની બેટરીની અભિવ્યક્તિને પ્રેરિત કરે છે. Nrf16 નાના Maf પ્રોટીન [41] સાથે હેટરોડાઇમરાઇઝેશન દ્વારા તેના કોગ્નેટ ટાર્ગેટ જનીનોના એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રતિભાવ પ્રમોટર તત્વો (ARE) સાથે જોડાય છે. આ સિસ્ટમ SFN જેવા પરોક્ષ એન્ટીઑકિસડન્ટો માટે ગતિશીલ અને સંવેદનશીલ પ્રતિભાવ રજૂ કરે છે, મિટોકોન્ડ્રિયા [XNUMX] દ્વારા પેદા થતા મુક્ત રેડિકલ, અથવા ઓક્સિડેટીવ તણાવના અન્ય શારીરિક સ્ત્રોતો [XNUMX].

મિટોકોન્ડ્રિયા ગતિશીલ, સબસેલ્યુલર ઓર્ગેનેલ્સ છે જે એટીપી ઉત્પાદન અને ઇન્ટ્રાસેલ્યુલર કેલ્શિયમ બફરિંગથી લઈને રેડોક્સ નિયમન અને એપોપ્ટોસિસ [13], [49] સુધીના સેલ્યુલર કાર્યોનું નિયમન કરે છે. મિટોકોન્ડ્રિયા કોષની અંદર પ્રતિક્રિયાશીલ ઓક્સિજન પ્રજાતિઓ (ROS) ના મુખ્ય સ્ત્રોતનું પણ પ્રતિનિધિત્વ કરે છે. તેથી, સેલ્યુલર જરૂરિયાતોને પહોંચી વળવા એટીપી ઉત્પાદનને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવા માટે મિટોકોન્ડ્રીયલ ફંક્શનનું યોગ્ય નિયમન જરૂરી છે અને સાથે સાથે અતિશય મુક્ત રેડિકલ ઉત્પાદનની સંભવિત હાનિકારક અસરોને ઘટાડે છે. માઇટોકોન્ડ્રીયલ ફંક્શનના ફાઇન મોડ્યુલેશન માટે એક નિર્ણાયક આવશ્યકતા એ છે કે મિટોકોન્ડ્રિયા માટે બાયોકેમિકલ મશીનો અને વિશાળ, પ્રતિભાવશીલ નેટવર્કના ભાગ રૂપે સ્વતંત્ર રીતે કાર્ય કરવાની ક્ષમતા છે.

મિટોકોન્ડ્રીયલ નેટવર્ક મોર્ફોલોજી અને કાર્ય ફિશન અને ફ્યુઝન વચ્ચેના નિયમન સંતુલન દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે. કોષ વિભાજન [28] દરમિયાન માઇટોકોન્ડ્રિયાના પુત્રી કોષ વારસા માટે તેમજ વિધ્રુવિત અથવા ક્ષતિગ્રસ્ત મિટોકોન્ડ્રિયાના પસંદગીયુક્ત, ઓટોફેજિક અધોગતિ માટે મિટોકોન્ડ્રીયલ વિભાજન જરૂરી છે, જેને મિટોફેજી [1] કહેવાય છે. તેનાથી વિપરીત, મિટોકોન્ડ્રીયલ જીનોમના પૂરક અને પડોશી મિટોકોન્ડ્રિયા [54] વચ્ચે ઇલેક્ટ્રોન ટ્રાન્સપોર્ટ ચેઇન ઘટકોની વહેંચણી માટે ફ્યુઝન જરૂરી છે. મોલેક્યુલર સ્તરે, મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન અને ફ્યુઝન મોટા, ડાયનામીન જેવા જીટીપીસેસ દ્વારા નિયંત્રિત થાય છે. ત્રણ ઉત્સેચકો મુખ્યત્વે ફ્યુઝનનું નિયમન કરે છે: Mitofusins ​​1 અને 2 (Mfn1/2) એ બે-પાસ બાહ્ય પટલ પ્રોટીન છે જે અડીને આવેલા મિટોકોન્ડ્રિયા [15], [25], [37] વચ્ચે હેટરોટાઇપિક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા બાહ્ય પટલના સંમિશ્રણને મધ્યસ્થી કરે છે, જ્યારે OPA1 એ એક આંતરિક ભાગ છે. મેમ્બ્રેન પ્રોટીન જે એક સાથે આંતરિક પટલના મેલ્ડિંગને નિયંત્રિત કરીને મેટ્રિક્સ કનેક્ટિવિટી સુનિશ્ચિત કરે છે [5]. ત્રણેય પ્રોટીનની GTPase પ્રવૃત્તિ મજબૂત ફ્યુઝન માટે જરૂરી છે [5], [18], અને OPA1 એ પ્રોટીઝ OMA1 [14], PARL [6] અને YME1L [45] દ્વારા મિટોકોન્ડ્રીયલ આંતરિક પટલની અંદર જટિલ પ્રોટીઓલિસિસ દ્વારા વધુ નિયંત્રિત થાય છે. ]. અગત્યની રીતે, ક્ષતિગ્રસ્ત અને તંદુરસ્ત મિટોકોન્ડ્રિયાના એકીકરણને દબાવવા માટે કાર્યક્ષમ ફ્યુઝન માટે અખંડ મિટોકોન્ડ્રીયલ મેમ્બ્રેન સંભવિત જરૂરી છે [26].

મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન મુખ્યત્વે ડાયનામિન-સંબંધિત પ્રોટીન 1 (Drp1/DNM1L) નામના સાયટોસોલિક પ્રોટીન દ્વારા ઉત્પ્રેરિત થાય છે. Drp1 ને સાયટોસોલમાંથી મિટોકોન્ડ્રીયલ બાહ્ય પટલ [43] પર વિભાજનની સંભવિત જગ્યાઓ પર ભરતી કરવામાં આવે છે. બાહ્ય પટલ પર Drp1 માટેના મુખ્ય રીસેપ્ટર્સ મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન ફેક્ટર (Mff) [32] અને ઓછા અંશે, ફિશન 1 (Fis1) [51] છે. વધુમાં, એક ડીકોય રીસેપ્ટર, MIEF1/MiD51, શોધાયું હતું જે સંભવિત વિચ્છેદન સાઇટ્સ [1] પર Drp58 પ્રોટીનની પ્રવૃત્તિને વધુ મર્યાદિત કરવા માટે કાર્ય કરે છે. એકવાર માઇટોકોન્ડ્રીયલ બાહ્ય પટલમાં ડોક થઈ જાય પછી, Drp1 મિટોકોન્ડ્રીયનના શરીરની આસપાસ સર્પાકાર જેવી રચનામાં ઓલિગોમેરાઇઝ કરે છે અને પછી GTP હાઇડ્રોલિસિસમાંથી મેળવેલી ઊર્જાનો ઉપયોગ માઇટોકોન્ડ્રીયલ બાહ્ય અને આંતરિક પટલના ભૌતિક વિચ્છેદનને મધ્યસ્થી કરવા માટે કરે છે [17]. એન્ડોપ્લાઝમિક રેટિક્યુલમ-વ્યુત્પન્ન ટ્યુબ્યુલ્સ Drp1 ઓલિગોમેરાઇઝેશન પહેલા મિટોકોન્ડ્રિયાના પ્રારંભિક સંકોચન તરીકે કામ કરે છે, જે સાક્ષાત્કારને રેખાંકિત કરે છે કે બિન-સંકુચિત મિટોકોન્ડ્રિયા પૂર્ણ થયેલા Drp1 સર્પાકાર [12] ના અનુમતિશીલ પરિઘ કરતા પહોળા છે. એક્ટિન ડાયનેમિક્સ ER-માઇટોકોન્ડ્રિયા ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ માટે પણ મહત્વપૂર્ણ છે જે માઇટોકોન્ડ્રીયલ વિભાજન [24] પહેલા હોય છે. મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશનમાં તેની ભૂમિકા ઉપરાંત, Drp1 પેરોક્સિસોમના વિભાજનને ઉત્પ્રેરિત કરે છે [40].

Drp1 એ સારી લાક્ષણિકતા ધરાવતા ડાયનામિન પ્રોટીન સાથે ખૂબ જ સમાન છે જેમાં બંને પ્રોટીન એન-ટર્મિનલ GTPase ડોમેન ધરાવે છે, એક મધ્ય ડોમેન જે સ્વ-ઓલિગોમેરાઇઝેશન માટે મહત્વપૂર્ણ છે, અને C-ટર્મિનલ GTPase ઇફેક્ટર ડોમેન [31]. Drp1 તેના રીસેપ્ટર પ્રોટીન Mff અને Fis1 સાથેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓના સંયોજન દ્વારા અને Drp1 [2] ના અનન્ય B-insert ડોમેન દ્વારા મિટોકોન્ડ્રીયા-વિશિષ્ટ ફોસ્ફોલિપિડ કાર્ડિયોલિપિન માટેના જોડાણ દ્વારા મિટોકોન્ડ્રીયલ મેમ્બ્રેન માટે પસંદગીક્ષમતા પ્રાપ્ત કરે છે. Drp1 સામાન્ય રીતે સાયટોપ્લાઝમમાં હોમોટેટ્રામર તરીકે અસ્તિત્વ ધરાવે છે, અને મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન સાઇટ્સ પર ઉચ્ચ ક્રમની એસેમ્બલી Drp1 [3] ના મધ્ય ડોમેન દ્વારા મધ્યસ્થી કરવામાં આવે છે.

માઇટોકોન્ડ્રીયલ ફંક્શન અને KEAP1-Nrf2-ARE પાથવે વચ્ચેની ગર્ભિત લિંકને જોતાં, અમે માઇટોકોન્ડ્રીયલ માળખું અને કાર્ય પર Nrf2 સક્રિયકરણની અસરોની તપાસ કરી. અમે અહીં દર્શાવીએ છીએ કે SFN મિટોકોન્ડ્રીયલ હાયપરફ્યુઝનને પ્રેરિત કરે છે જે, અનપેક્ષિત રીતે, Nrf2 અને KEAP1 બંનેથી સ્વતંત્ર છે. SFN ની આ અસર Drp1 ફંક્શનના અવરોધ દ્વારા થાય છે. અમે આગળ દર્શાવીએ છીએ કે SFN એપોપ્ટોસિસ માટે પ્રતિકાર પ્રદાન કરે છે જે Nrf2-સ્વતંત્ર છે અને નકલ કરે છે જે Drp1 ના અવક્ષય પામેલા કોષોમાં જોવા મળે છે. આ ડેટા સામૂહિક રીતે સૂચવે છે કે Nrf2 ને સ્થિર કરવા અને સક્રિય કરવા ઉપરાંત, SFN મિટોકોન્ડ્રીયલ ગતિશીલતાને મોડ્યુલેટ કરે છે અને સેલ્યુલર ફિટનેસ અને સર્વાઈવલને સાચવે છે.

પરિણામો

સલ્ફોરાફેન Nrf2/KEAP1- મિટોકોન્ડ્રિયાના સ્વતંત્ર હાયપરફ્યુઝનને પ્રેરિત કરે છે

માઇટોકોન્ડ્રીયલ નેટવર્ક ડાયનેમિક્સ પર Nrf2 સક્રિયકરણની અસરોનો અભ્યાસ કરતી વખતે, અમે શોધી કાઢ્યું કે અમર, માનવ રેટિના પિગમેન્ટ એપિથેલિયલ (RPE-1) કોષોની સારવાર સલ્ફોરાફેન (SFN), Nrf2 સિગ્નલિંગના એક શક્તિશાળી સક્રિયકર્તા સાથે, એક મજબૂત સંમિશ્રણને પ્રેરિત કરે છે. મિટોકોન્ડ્રીયલ નેટવર્ક જ્યારે વાહન-સારવાર નિયંત્રણ કોષો (ફિગ. 1A અને B) સાથે સરખામણી કરે છે. આ કોશિકાઓમાં મિટોકોન્ડ્રિયાનું મોર્ફોલોજી એન્ડોજેનસ Drp1, મુખ્ય મિટોકોન્ડ્રીયલ વિભાજન પરિબળ (ફિગ. 1A) ના siRNA દ્વારા અવક્ષય પામેલા કોષોમાંના મિટોકોન્ડ્રિયા સાથે ખૂબ સામ્યતા ધરાવે છે. આ પરિણામ એ રસપ્રદ વિચાર ઉભો કર્યો કે માઇટોકોન્ડ્રીયલ વિભાજન અને ફ્યુઝન સ્થિતિ કોષમાં Nrf2 સ્તરોને સીધો પ્રતિસાદ આપે છે. જો કે, અન્ય Nrf2 સ્ટેબિલાઇઝર્સ અને એક્ટિવેટર્સ જેવા કે પ્રોટીઝોમ ઇન્હિબિટર MG132, પ્રો-ઑક્સિડન્ટ tBHQ, અથવા Nrf2 અવરોધક KEAP1 નો નોકડાઉન સાથેના કોષોનું ઉત્તેજન મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝન (ફિગ. 1A અને B)ને પ્રેરિત કરતું નથી. આ મેનિપ્યુલેશન્સ દ્વારા Nrf2 ના સ્થિરીકરણની પુષ્ટિ અંતર્જાત Nrf2 (ફિગ. 1C) માટે પશ્ચિમી બ્લોટિંગ દ્વારા કરવામાં આવી હતી. વધુમાં, Nrf2 ની અભિવ્યક્તિ SFN-પ્રેરિત માઇટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝન માટે ડિસ્પેન્સેબલ હતી, કારણ કે siRNA સાથે એન્ડોજેનસ Nrf2 નો નોકડાઉન આ ફેનોટાઇપ (ફિગ. 1D�F) નો સામનો કરવામાં નિષ્ફળ ગયો. કારણ કે SFN KEAP1 [2] ના સિસ્ટીન અવશેષોને સહસંયોજિત રીતે સંશોધિત કરીને KEAP1-Nrf21-ARE પાથવેને ઉત્તેજિત કરે છે, અમે KEAP1 ને નીચે પછાડ્યું કે શું SFN-પ્રેરિત મિટોકોન્ડ્રીયલ હાયપરફ્યુઝન KEAP1-આશ્રિત, પરંતુ Nrf2 સ્વતંત્ર દ્વારા ઉત્તેજિત થાય છે. જો કે, KEAP1 નું અવક્ષય પણ SFN-પ્રેરિત મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝન (ફિગ. 1G�I) નાબૂદ કરવામાં નિષ્ફળ ગયું. હકીકતમાં, SFN એ KEAP1 (ફિગ. 1G, પેનલ b વિરુદ્ધ પેનલ d) ના અવક્ષયને કારણે પ્રેરિત પ્રો-ફિશન મોર્ફોલોજીને ઉલટાવી દીધું. આ પરિણામો સૂચવે છે કે SFN ટ્રીટમેન્ટ કેનોનિકલ KEAP1-Nrf2-ARE પાથવેથી સ્વતંત્ર મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝનનું કારણ બને છે અને અમને પૂછપરછ કરવા તરફ દોરી જાય છે કે શું SFN એ મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન અથવા ફ્યુઝન મશીનરીના ઘટકોને સીધી અસર કરે છે.

સલ્ફોરાફેન Drp1 ના મિટોકોન્ડ્રીયલ એસોસિએશનને નબળી પાડે છે

SFN-સારવાર માઇટોકોન્ડ્રીયલ હાયપરફ્યુઝનને પ્રેરિત કરે છે તે શોધના આધારે, અમે તર્ક કર્યો કે આ ફેનોટાઇપ કાં તો અતિશય ફ્યુઝન પ્રવૃત્તિનું પરિણામ હતું અથવા વિભાજન પ્રવૃત્તિના અવરોધનું પરિણામ હતું. આ બે શક્યતાઓ વચ્ચે ભેદભાવ કરવા માટે, અમે SFN ની હાજરી અને ગેરહાજરીમાં પેરોક્સિસોમ્સના મોર્ફોલોજીની તુલના કરી. પેરોક્સિસોમ્સ મિટોકોન્ડ્રિયા જેવા જ છે કારણ કે તે ગતિશીલ ઓર્ગેનેલ્સ છે જેનો આકાર અને લંબાઈ સતત પ્રવાહમાં હોય છે [44]. પેરોક્સિસોમ્સ તેમના બાહ્ય પટલમાં Fis1 અને Mff બંને ધરાવે છે અને પરિણામે, Drp1- મધ્યસ્થી વિભાજન [22], [23] માટે લક્ષ્યાંક છે. જો કે, પેરોક્સિસોમ્સ મિટોકોન્ડ્રીયલ નેટવર્કની ફ્યુઝન મશીનરીનો ઉપયોગ કરતા નથી અને પરિણામે, ફ્યુઝન [39]માંથી પસાર થતા નથી. તેના બદલે, પટલ અને પ્રોટીન [44]ના ડી નોવો ઉમેરા દ્વારા હાલના પેરોક્સિસોમના લંબાણ દ્વારા પેરોક્સિસોમલ વિભાજનનો વિરોધ કરવામાં આવે છે. કારણ કે પેરોક્સિસોમ્સમાં Mfn1/2 અને OPA1 નો અભાવ છે, અમે તર્ક આપ્યો કે જો SFN ફિશન મશીનરીને અટકાવવાને બદલે ફ્યુઝન મશીનરીને સક્રિય કરે છે, તો પેરોક્સિસોમ લંબાઈને અસર થશે નહીં. વાહન-સારવાર કરાયેલ કોષોમાં, પેરોક્સિસોમ ટૂંકા, ગોળ, પંચીફોર્મ ઓર્ગેનેલ્સ (ફિગ. 2, પેનલ્સ b અને d) તરીકે જાળવવામાં આવે છે. જો કે, SFN સારવારથી નિયંત્રણ કોષો (ફિગ. 2, પેનલ્સ f અને h) ની તુલનામાં પેરોક્સિસોમની લંબાઈ ~ 2-ગણી વધી ગઈ. તદુપરાંત, ઘણા પેરોક્સિસોમ કેન્દ્રની નજીક પિન્ચ કરવામાં આવ્યા હતા, જે સંભવિત વિચ્છેદન ખામી સૂચવે છે (ફિગ. 2, પેનલ એચ, એરોહેડ્સ). તેવી જ રીતે, Drp1 siRNA થી ટ્રાન્સફેક્ટ થયેલા કોષોમાં પેરોક્સિસોમ્સ અસામાન્ય રીતે લાંબા હતા (ફિગ. 2, પેનલ્સ j અને l), પેરોક્સિસોમલ ફિસશન માટે Drp1 જરૂરી છે તેની પુષ્ટિ કરે છે અને સૂચવે છે કે SFN-ટ્રીટમેન્ટ ફાઈને વિક્ષેપિત કરીને મિટોકોન્ડ્રીયલ અને પેરોક્સિસોમલ ફેનોટાઈપ્સનું કારણ બને છે.

અમે આગળ નક્કી કર્યું કે કેવી રીતે SFN Drp1 ફંક્શનને પ્રતિબંધિત કરે છે. શક્યતાઓમાં અભિવ્યક્તિ સ્તરમાં ઘટાડો, મિટોકોન્ડ્રિયામાં ભરતી/જાળવણી, ઓલિગોમેરાઇઝેશન અથવા GTPase ની એન્ઝાઇમેટિક પ્રવૃત્તિનો સમાવેશ થાય છે. આમાંના કોઈપણ એકમાં ઉણપના પરિણામે મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન અને હાયપરફ્યુઝન ઘટશે. અમે SFN-સારવાર (ફિગ. 1C અને 1A) પછી Drp3 પ્રોટીન સ્તરોમાં પુનઃઉત્પાદનક્ષમ ફેરફારો શોધી શક્યા નથી, અને તેથી નિષ્કર્ષ પર આવ્યા કે SFN Drp1 સ્થિરતા અથવા અભિવ્યક્તિને બદલતું નથી, જે Drp1 નું અર્ધ જીવન >10 h [50] સાથે સુસંગત છે. અને અમારી SFN સારવાર ટૂંકા ગાળાની છે. આગળ, અમે તપાસ કરી કે શું SFN એ મિટોકોન્ડ્રિયામાં Drp1 ની ભરતી અથવા જાળવણીને અસર કરી છે. અપૂર્ણાંક અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું હતું કે SFN એ મિટોકોન્ડ્રીયલ અપૂર્ણાંક (ફિગ. 1A, લેન 3�7 અને ફિગ. 8B)માંથી Drp3 ની ખોટને પ્રેરિત કરે છે. અગાઉ નોંધ્યા મુજબ [43], સાયટોપ્લાઝમમાં રહેલ મોટાભાગના એન્ઝાઇમ સાથે સ્થિર સ્થિતિ દરમિયાન કોઈપણ સમયે Drp1 (~3%) નો એક નાનો અંશ મિટોકોન્ડ્રીયલ નેટવર્ક સાથે સંકળાયેલ છે (ફિગ. 3A, લેન 5�8 ). આ અપૂર્ણાંક ડેટાની પુષ્ટિ સહ-સ્થાનિકીકરણ વિશ્લેષણનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવી હતી જેમાં SFN-સારવાર (ફિગ. 40C અને D) પછી મિટોકોન્ડ્રિયા-સ્થાનિક, પંકેટેટ Drp1 ફોસીમાં ~3% ઘટાડો જોવા મળ્યો હતો. એકસાથે, આ ડેટા સૂચવે છે કે SFN દ્વારા પ્રેરિત મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝન, ઓછામાં ઓછું આંશિક રીતે, મિટોકોન્ડ્રિયા સાથે Drp1 ના ક્ષીણ જોડાણને કારણે છે. અમારો ડેટા ભેદ પાડતો નથી કે શું SFN મિટોકોન્ડ્રીયલ ભરતીમાં દખલ કરે છે વિરુદ્ધ Drp1 ની મિટોકોન્ડ્રીયલ રીટેન્શન, અથવા બંને, કારણ કે એન્ડોજેનસ Drp1 નું વિશ્લેષણ જીવંત-સેલ માઇક્રોસ્કોપી દ્વારા GTPase ને વિઝ્યુઅલાઈઝ કરવા માટે યોગ્ય ન હતું.

સલ્ફોરાફેન Nrf2 થી સ્વતંત્ર સ્ટેરોસ્પોર્ટિન-પ્રેરિત એપોપ્ટોસિસ સામે રક્ષણ આપે છે

અગાઉના કાર્યએ દર્શાવ્યું છે કે એપોપ્ટોસીસ [૧૧] દરમિયાન બેક્સ/બેક દ્વારા ઉત્પાદિત બાહ્ય માઇટોકોન્ડ્રીયલ પટલમાં છિદ્રોની રચનામાં માઇટોકોન્ડ્રીયલ વિભાજનને અનુમતિ છે. એપોપ્ટોસીસ [૧૧] દરમિયાન ડીઆરપી11ને પસંદગીયુક્ત રીતે મિટોકોન્ડ્રિયામાં ભરતી કરવામાં આવી હોવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે [૧૧] અને તેની સાથે સુસંગત, પ્રક્રિયાની શરૂઆતમાં ફ્રેગમેન્ટેડ મિટોકોન્ડ્રિયાનું અવલોકન કરવામાં આવ્યું છે [૨૭]. તેનાથી વિપરિત, માઇટોકોન્ડ્રીયલ ફિશનને અટકાવવાથી બાહ્ય પટલના છિદ્રોની રચનાને અવરોધિત કરીને એપોપ્ટોસીસને અટકાવવાનું માનવામાં આવે છે જે સાયટોક્રોમ સી [1] ના પ્રકાશન માટે પરવાનગી આપે છે. તદનુસાર, ઉત્તેજક મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝન સ્ટેરોસ્પોરીન (STS) [11] સહિતના સંયોજનો દ્વારા પ્રેરિત એપોપ્ટોસિસની પ્રગતિમાં વિલંબ કરે છે. SFN RPE-27 કોષોને STS-મધ્યસ્થી એપોપ્ટોસિસથી સુરક્ષિત કરે છે કે કેમ તે નિર્ધારિત કરવા અને જો એમ હોય તો, આ માટે Nrf53 ની જરૂર છે કે કેમ, અમે પોલી ADP રાઈબોઝ પોલિમરેઝ (PARP) ક્લીવેજ, સક્રિય કેસ્પેસ-14 નું સબસ્ટ્રેટ અને નિર્ણાયક માર્કર, સહેલાઈથી પ્રેરિત કરવા માટે એક પરીક્ષાની સ્થાપના કરી. એપોપ્ટોસિસ. 1 કલાક માટે 2 �M STS સાથે RPE-3 કોષોની સારવાર માત્ર PARP ના ખૂબ જ સાધારણ ક્લીવેજનું કારણ બને છે તેમ છતાં SFN સહ-સારવાર દ્વારા આને અટકાવવામાં આવ્યું હતું (દા.ત., ફિગ. 1A, લેન 1 વિરુદ્ધ 6). આ પરીક્ષાની મજબૂતાઈ વધારવા માટે, અમે કોષોને એન્ટિ-એપોપ્ટોટિક પરિબળ, Bcl-XL ને લક્ષ્યાંકિત કરતી siRNA સાથે પૂર્વ-સારવાર દ્વારા STS-પ્રેરિત એપોપ્ટોસિસ પ્રત્યે વધુ સંવેદનશીલ બનાવીએ છીએ. આ પ્રીટ્રીટમેન્ટે Bcl-XL ની અભિવ્યક્તિને ઘટાડી અને STS (ફિગ. 4B, લેન 3-4 સાથે લેન 4 ની સરખામણી કરો) સમયના કાર્ય તરીકે સ્પષ્ટપણે PARP ક્લીવેજને પ્રોત્સાહન આપ્યું. અગત્યની રીતે, SFN સાથે 2 કલાક પૂર્વ-સારવારથી STS (ફિગ. 4C, લેન 10 વિરુદ્ધ 2 અને લેન 4 વિરુદ્ધ 3). તેવી જ રીતે, CRISPR/Cas4 દ્વારા Nrf5 ના સ્થિર રીતે અવક્ષય પામેલા કોષો SFN પૂર્વ-સારવાર (ફિગ. 6C, લેન 2 વિરુદ્ધ 9 અને લેન 4 વિરુદ્ધ 11 અને ફિગ. 12D) દ્વારા તુલનાત્મક રીતે STS ટોક્સિસિટીથી સુરક્ષિત હતા. આ સંરક્ષણ PARP ક્લીવેજ (ફિગ. 13C અને D) અને સેલ્યુલર મોર્ફોલોજી (ફિગ. 14E) બંનેનો ઉપયોગ કરીને રીડઆઉટ તરીકે જોવામાં આવ્યું હતું. CRISPR/Cas4 દ્વારા Nrf4 અવક્ષયની અસરકારકતા પશ્ચિમી બ્લોટિંગ (ફિગ. 4C, Nrf2 બ્લૉટ) દ્વારા પુષ્ટિ કરવામાં આવી હતી. અનુમાન મુજબ, Drp9 ના ઘટતા કોષો, જે હાયપરફ્યુઝન ફેનોટાઇપ (ફિગ. 4A) પણ આપે છે, SFN (ફિગ. 2F અને G) સાથે ઉકાળેલા નિયંત્રણ કોષોની તુલનામાં STS ના પ્રતિભાવમાં PARP ક્લીવેજને પણ અવરોધિત કરે છે. એકસાથે, આ તારણો Nrf1 ના સ્થિરીકરણ અને સક્રિયકરણથી સ્વતંત્ર, Drp1 ફંક્શનને પ્રતિબંધિત કરવાની તેની ક્ષમતા દ્વારા એપોપ્ટોસિસ સામે રક્ષણ આપતા SFN સાથે સુસંગત છે.

ચર્ચા

અમે શોધ્યું છે કે SFN KEAP1-Nrf2-ARE પાથવે પર તેની અસરોથી સ્વતંત્ર મિટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન/ફ્યુઝન ડાયનેમિક્સને મોડ્યુલેટ કરે છે. માઇટોકોન્ડ્રીયલ ડિસફંક્શન અને આરઓએસ પ્રોડક્શન અને Nrf2 ના સક્રિયકરણ દ્વારા મિટોકોન્ડ્રીયા-પ્રાપ્ત મુક્ત રેડિકલને સ્ક્વેલ્ચ કરવાની આવશ્યકતાને કારણે આ રસપ્રદ છે. પ્રોસ્ટેટ કેન્સર, અવરોધક પલ્મોનરી રોગ, અને સિકલ સેલ રોગ [30], [7], [10], [47], [XNUMX], [XNUMX], [XNUMX] XNUMX].

કારણ કે SFN એ એક આઇસોથિયોસાયનેટ છે [56] અને તે Nrf2 ડિગ્રેડેશન [1]ને દબાવવા માટે ક્રિટિકલ KEAP2 સિસ્ટીનને સીધું જ એસીલેટ કરીને Nrf21 સિગ્નલિંગને સક્રિય કરે છે, તે અનુસરે છે કે SFN ફિશન અથવા ફ્યુઝન ફેક્ટરની પ્રવૃત્તિને મોડ્યુલેટ કરીને તેની પ્રો-ફ્યુઝન અસરોનો ઉપયોગ કરે છે. . અમારો ડેટા મજબૂતપણે Drp1 ને SFN દ્વારા નકારાત્મક રીતે નિયંત્રિત કરવામાં આવે છે, જો કે GTPase એ એસિલેશનનું સીધું લક્ષ્ય છે કે કેમ તે સ્પષ્ટ કરવાનું બાકી છે. આ જ્ઞાન અંતર હોવા છતાં, Drp1 નું કાર્ય SFN દ્વારા સ્પષ્ટપણે ચેડા કરવામાં આવી રહ્યું છે કારણ કે SFN સારવારના પ્રતિભાવમાં મિટોકોન્ડ્રિયા અને પેરોક્સિસોમ બંને હાયપરફ્યુઝ થઈ જાય છે અને આ ઓર્ગેનેલ્સ તેમના સંબંધિત વિચ્છેદનની ઘટનાઓ [1] માટે Drp38 શેર કરે છે. વધુમાં, SFN Drp1 ની માત્રા ઘટાડે છે જે મિટોકોન્ડ્રિયા (ફિગ. 3). કારણ કે અમારા પ્રયોગો તમામ અંતર્જાત પ્રોટીન સાથે કરવામાં આવ્યા હતા, માઇટોકોન્ડ્રીયલ ફિશન સાઇટ્સ પર અમારી Drp1 ની શોધ સ્થિર-સ્થિતિની સ્થિતિમાં છે, અને પરિણામે, અમે SFN દ્વારા થતા એન્ઝાઇમની રીટેન્શન ખામી વિરુદ્ધ ભરતી વચ્ચે તફાવત કરી શકતા નથી. વધુમાં, હજુ સુધી Drp1 ભરતીને અવરોધિત કરવા માટે SFN મિટોકોન્ડ્રિયા (Fis1 અથવા Mff) ખાતે રીસેપ્ટરને એસીલેટ કરે તેવી શક્યતાને અમે દૂર કરી શકતા નથી, અમને શંકા છે કે Drp1 સીધો સંશોધિત થયો છે. Drp1 માં નવ સિસ્ટીન છે, જેમાંથી આઠ મધ્ય ડોમેનમાં રહે છે જે ઓલિગોમેરાઈઝેશન માટે જરૂરી છે [3], અને જેમાંથી એક Drp1 ના C-ટર્મિનસ ખાતે GTPase ઇફેક્ટર ડોમેન (GED) માં રહે છે. આમાંના કોઈપણ સિસ્ટીનનું ડાયરેક્ટ એસીલેશન Drp1 માં પ્રવૃત્તિની ખામીનું કારણ બની શકે છે અને તેથી માઇટોકોન્ડ્રીયલ ડાયનેમિક્સ પર SFN ની અસર નીચે આવે છે. નોંધનીય રીતે, અગાઉનું કાર્ય સૂચવે છે કે ઓલિગોમેરાઇઝેશન અને ઉત્પ્રેરક પ્રવૃત્તિમાં ખામીઓ મિટોકોન્ડ્રિયા [1] ખાતે Drp52 ની જાળવણીને રદ કરી શકે છે. GED ડોમેનમાં Cys644 એ અગાઉના કાર્ય પર આધારિત ખાસ કરીને આકર્ષક લક્ષ્ય છે જે દર્શાવે છે કે આ સિસ્ટીન ફેનોકોપીઝનું પરિવર્તન જે Drp1 GTPase પ્રવૃત્તિને નબળી પાડે છે [4] અને આ ચોક્કસ સિસ્ટીન થિયોલ-રિએક્ટિવ ઇલેક્ટ્રોફાઈલ્સ [9] દ્વારા સંશોધિત થાય છે. આ ઉત્કૃષ્ટ પ્રશ્નના ઉકેલ માટે સામૂહિક સ્પેક્ટ્રોમેટ્રિક માન્યતાની જરૂર પડશે. સારાંશમાં, અમે તબીબી-સંબંધિત સંયોજન SFN માટે એક નવલકથા, સાયટોપ્રોટેક્ટીવ ફંક્શનની ઓળખ કરી છે. માસ્ટર એન્ટી-ઓક્સિડન્ટ ટ્રાન્સક્રિપ્શન ફેક્ટર Nrf2 ને સક્રિય કરવા ઉપરાંત, SFN મિટોકોન્ડ્રીયલ અને પેરોક્સિસોમલ ફ્યુઝનને પ્રોત્સાહન આપે છે, અને આ અસર Nrf2 થી સ્વતંત્ર છે. આ ઘટના અંતર્ગત મિકેનિઝમમાં GTPase Drp1 ના કાર્યમાં ઘટાડો સામેલ છે, જે મિટોકોન્ડ્રીયલ અને પેરોક્સિસોમલ ફિશનના પ્રાથમિક મધ્યસ્થી છે. SFN- મધ્યસ્થી મિટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝનનું મુખ્ય પરિણામ એ છે કે કોષો એપોપ્ટોસીસ ઇન્ડ્યુસર સ્ટેરોસ્પોરીનની ઝેરી અસરો સામે પ્રતિરોધક બની જાય છે. SFN ની આ વધારાની સાયટોપ્રોટેક્ટીવ ક્રિયા અસંખ્ય ન્યુરોડીજનરેટિવ રોગોમાં ખાસ ક્લિનિકલ ઉપયોગિતા હોઈ શકે છે જેના માટે વય અગ્રણી જોખમ પરિબળ છે (દા.ત., પાર્કિન્સન રોગ, અલ્ઝાઈમર રોગ, વય-સંબંધિત મેક્યુલર ડીજનરેશન) કારણ કે આ બિમારીઓ એપોપ્ટોસિસ સાથે સંકળાયેલી છે અને ઘટાડો થયો છે. Nrf2 [35], [36], [48] નું સ્તર અને/અથવા ડિસરેગ્યુલેશન.

સામગ્રી અને પદ્ધતિઓ

એપોપ્ટોસીસ એસેસ

નીચે દર્શાવેલ પ્રમાણે કોષોને સીડ કરવામાં આવ્યા હતા અને siRNA સાથે ટ્રાન્સફેક્ટ કરવામાં આવ્યા હતા. માઇટોકોન્ડ્રીયલ ફ્યુઝનને પ્રેરિત કરવા માટે કોષોને 50 ?M સલ્ફોરાફેન સાથે 2 કલાક માટે પૂર્વ-સારવાર કરવામાં આવી હતી અને પછી એપોપ્ટોસીસને પ્રેરિત કરવા માટે 1?M સ્ટેરોસ્પોરીન સાથે સારવાર કરવામાં આવી હતી. લણણીના સમયે, મીડિયાને વ્યક્તિગત ટ્યુબમાં એકત્રિત કરવામાં આવ્યું હતું અને પેલેટ એપોપ્ટોટિક કોશિકાઓ માટે હાઇ સ્પીડ સેન્ટ્રીફ્યુગેશનને આધિન હતું. આ કોષ પેલેટને અનુયાયી કોષો સાથે જોડવામાં આવ્યું હતું અને 2 વખત કેન્દ્રિત લેમ્મલી બફરમાં દ્રાવ્ય કરવામાં આવ્યું હતું. નમૂનાઓ PARP વિરોધી પશ્ચિમી બ્લોટિંગને આધિન હતા.

CRISPR/Cas9 કન્સ્ટ્રક્ટ જનરેશન

LentiCRISPR/eCas9 1.1 બનાવવા માટે, LentiCRISPR v2 (addgene #52961) ને પહેલા Age1 અને BamH1 સાથે કાપવામાં આવ્યું હતું. આગળ, eSpCas9 9 (addgene #1.1) માંથી SpCas71814 ને નીચેના પ્રાઇમર્સનો ઉપયોગ કરીને Age1 અને BamH1 ઓવરહેંગ્સ સાથે PCR એમ્પ્લીફાઇડ કરવામાં આવ્યું હતું (ફોરવર્ડ AGCGCACCGGTTCTAGAGCGCGCTGCCCACCATGGACTATAAGGACCACGAC, ઉપર AAGCGTTTGTTCCGTTCCGTTCCGTTGTCGCTGCTGCTGCTGCTGCTGક્ટરને વિપરિત કાપીને) Benchling.com નો ઉપયોગ કરીને sgRNA સિક્વન્સ નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા. સૌથી વધુ લક્ષ્યાંકિત અને સૌથી ઓછા લક્ષ્યાંક સિવાયના સ્કોર સાથે કોડિંગ ક્રમને લક્ષ્ય બનાવવા માટે પરિમાણો સેટ કરવામાં આવ્યા હતા. annealed અને ligated BsmB2 LentiCRISPR / eCas2 1 કાપી કે હતા નીચેની સિક્વન્સ (; એચએસ sgNFE2L2 # 2 અર્થમાં CACCGGTTTCTGACTGGATGTGCT, antisense AAACAGCACATCCAGTCAGAAACC એચએસ sgNFE2L2 # 3 અર્થમાં CACCGGAGTAGTTGGCAGATCCAC, antisense AAACGTGGATCTGCCAACTACTCC લક્ષ્યાંક ક્રમ અંડરલાઈન sgNFE1L9 # 1.1 અર્થમાં CACCGCGACGGAAAGAGTATGAGC, antisense AAACGCTCATACTCTTTCCGTCGC એચએસ). લેન્ટીવાયરલી સંક્રમિત RPE-1 કોષોને પ્યુરોમાસીન વડે પસંદ કરવામાં આવ્યા હતા અને એક સંકલિત વસ્તી તરીકે જાળવવામાં આવ્યા હતા. ઇમ્યુનોફ્લોરેસેન્સ અને વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ દ્વારા નોકઆઉટની પુષ્ટિ કરવામાં આવી હતી.

સેલ કલ્ચર અને ટ્રાન્સફેક્શન્સ

ટેલોમેરેઝ (RPE-1) (ATCC) સાથે રૂપાંતરિત માનવ રેટિના રંગદ્રવ્ય ઉપકલા કોષોને ડુલ્બેકોના મોડિફાઇડ ઇગલ મીડિયમ (DMEM) માં સંવર્ધન કરવામાં આવ્યું હતું જેમાં 1 g/L ગ્લુકોઝ પેનિસિલિન, સ્ટ્રેપ્ટોમાસીન, 1X નોન-આવશ્યક એમિનો એસિડ (ટીલોકો એસિડ) સાથે પૂરક હતું. અને 10% ફેટલ બોવાઇન સીરમ (લાઇફ ટેક્નોલોજી). siRNA-સંક્રમણ માટે, 30,000�35,000 કોષો/mL રાતોરાત સીડ કરવામાં આવ્યા હતા. કોશિકાઓએ 10 nM siRNA મેળવ્યું જે સીરમ-ફ્રી DMEM માં ભળે છે અને 0.3% ઇન્ટરફેરિન ટ્રાન્સફેક્શન રીએજન્ટ (પોલીપ્લસ) સાથે જોડાય છે. એપોપ્ટોસિસ સંવેદના માટે, કોષોને 1 nM Bcl-XL siRNA પ્રાપ્ત થયું. કોષો સંક્રમણ પછીના 2–3 દિવસમાં કાપવામાં આવ્યા હતા.

રસાયણો, એન્ટિબોડીઝ અને siRNA ઓલિગોસ

?-ટ્યુબ્યુલિન (સેલ સિગ્નલિંગ), ?-ટ્યુબ્યુલિન (સિગ્મા), Drp1 (BD બાયોસાયન્સિસ), KEAP1 (પ્રોટીનટેક), લેમિન B1 (Abcam), PARP (સેલ સિગ્નલિંગ), PMP70 (Abcam), અને Tom20 (BD બાયોસાયન્સિસ) સામે એન્ટિબોડીઝ ) વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ અને ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ માટે 1:1000 ડિલ્યુશન પર ઉપયોગમાં લેવાય છે. ઇન-હાઉસ, વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ [2], [1] માટે 2000:34 વાગ્યે એન્ટિ-એનઆરએફ59 રેબિટ એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. સલ્ફોરાફેન (સિગ્મા) અને સ્ટેરોસ્પોરીન (ટોક્રિસ) નો ઉપયોગ અનુક્રમે 50?M અને 1?M પર થયો હતો. Drp1 (ધર્માકોન), Nrf2 (ધર્માકોન), KEAP1 (સેલ સિગ્નલિંગ), અને Bcl-XL (સેલ સિગ્નલિંગ) સામે siRNAs નો ઉપયોગ 10 nM પર થતો હતો સિવાય કે અન્યથા નોંધવામાં આવે.

ઇમ્યુનોફ્લોરેસેન્સ અને વિવો લેબલીંગમાં

18 મીમી કાચની કવરસ્લિપ્સ પર બીજવાળા કોષોને વાહન અથવા દવા સાથે સારવાર આપવામાં આવી હતી, 3.7% ફોર્માલ્ડિહાઇડમાં નિશ્ચિત કરવામાં આવી હતી અને પછી 0.2 મિનિટ માટે બરફ પર 100% ટ્રાઇટોન X-10/PBS માં પ્રવેશી હતી. પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝ PBS માં 3% બોવાઇન સીરમ આલ્બ્યુમિન (BSA) માં રાતોરાત 4°C પર ઉકાળવામાં આવ્યા હતા. PBS ધોવા પછી, 1% BSA/PBS માં કોષોને 488 કલાક માટે જાતિ-યોગ્ય, Alexa546- અથવા Alexa1-, સંયોજિત ગૌણ એન્ટિબોડીઝ (1000:0.1 પાતળું) અને 3 ?g/mL DAPI (સિગ્મા) માં ઉકાળવામાં આવ્યા હતા. મિટોકોન્ડ્રિયાને કાં તો એન્ટિ-ટોમ20 ઇમ્યુનોફ્લોરેસેન્સ દ્વારા અથવા ફિક્સેશન પહેલા 200 �C પર 30 મિનિટ માટે સીરમ-ફ્રી DMEM માં 37 nM MitoTracker Red CMXRos (મોલેક્યુલર પ્રોબ્સ, Inc.) માં કોષોને ઉકાળવા દ્વારા વિઝ્યુઅલાઈઝ કરવામાં આવ્યું હતું.

માઇક્રોસ્કોપી અને છબી વિશ્લેષણ

ઇમ્યુનોફ્લોરેસેન્સ સેમ્પલ LSM710 કોન્ફોકલ માઈક્રોસ્કોપ (કાર્લ ઝીસ) પર જોવામાં આવ્યા હતા. એડોબ ફોટોશોપ CS63 નો ઉપયોગ કરીને 100X અથવા 6X તેલ નિમજ્જન હેતુઓ અને છબીઓને સમાયોજિત અને વિસ્તૃત કરીને માઇક્રોગ્રાફ્સ કેપ્ચર કરવામાં આવ્યા હતા. સહ-સ્થાનિકીકરણ વિશ્લેષણ કાર્લ ઝેઇસ LSM710 સહ-સ્થાનિકીકરણ સુવિધાનો ઉપયોગ કરીને થ્રેશોલ્ડ સાથે મેન્યુઅલી સેટ કરવામાં આવ્યું હતું જ્યારે નમૂનાઓની ઓળખને આંધળી કરવામાં આવી હતી. સમગ્ર સ્કેલ બાર, સિવાય કે અન્યથા સૂચવવામાં આવે, 10 �m છે. મિટોકોન્ડ્રીયલ મોર્ફોલોજીનું મૂલ્યાંકન બ્લાઇન્ડેડ સ્કોરિંગ દ્વારા કરવામાં આવ્યું હતું. જો કોષના મિટોકોન્ડ્રિયાને બહુવિધ, ગોળાકાર, ભેદભાવ પંચા તરીકે જાળવવામાં આવે, તો કોષને ફિશન તરીકે અંકિત કરવામાં આવે છે. જો વ્યક્તિગત મિટોકોન્ડ્રિયા અસ્પષ્ટ હોય અને સમગ્ર મિટોકોન્ડ્રીયલ નેટવર્ક સતત દેખાય, તો કોષને ફ્યુઝન તરીકે સ્કોર કરવામાં આવ્યો હતો. અન્ય તમામ કોષો, જેમાં ક્લસ્ટરિંગ મિટોકોન્ડ્રિયા સાથેનો સમાવેશ થાય છે, તેને "મધ્યવર્તી" તરીકે અંકિત કરવામાં આવ્યો હતો.

સબસેલ્યુલર અપૂર્ણાંક

RPE-1 કોષો સંગમ માટે ઉગાડવામાં આવ્યા હતા. PBS ધોવા પછી, કોષોને 600 મિનિટ માટે 10�g પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશનને આધિન કરવામાં આવ્યું હતું અને 600 ?L આઇસોલેશન બફર (210 mM મેનિટોલ, 70 mM સુક્રોઝ, 5 mM MOPS, 1 mM EDTA pH 7.4+1 mM PFMS) માં ફરીથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવ્યા હતા. સસ્પેન્શનને ડાઉન્સ હોમોજેનાઇઝરમાં 30 વખત લાઇસ કરવામાં આવ્યું હતું. હોમોજેનેટના અપૂર્ણાંકને �સંપૂર્ણ કોષ લાયસેટ તરીકે સાચવવામાં આવ્યો હતો. બાકીના ભાગને પેલેટ ન્યુક્લી માટે 800 મિનિટ માટે 10 ગ્રામ પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશનને આધિન કરવામાં આવ્યું હતું. બાકીના ન્યુક્લી અને અનલિસ્ડ કોષોને સાફ કરવા માટે સુપરનેટન્ટ્સને 1500 મિનિટ માટે 10g પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરવામાં આવ્યું હતું. આ સુપરનેટન્ટને પેલેટ મિટોકોન્ડ્રિયા માટે 15,000 મિનિટ માટે 15 ગ્રામ પર સેન્ટ્રીફ્યુગેશન કરવામાં આવ્યું હતું. સુપરનેટન્ટને સાયટોસોલિક અપૂર્ણાંક તરીકે સાચવવામાં આવ્યું હતું. પેલેટને પીબીએસ વડે હળવેથી ધોવાઇ હતી અને આઇસોલેશન બફરમાં ફરીથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવી હતી. દરેક અપૂર્ણાંકની પ્રોટીન સાંદ્રતા બાયસિન્કોનિનિક એસિડ (BCA) એસે દ્વારા માપવામાં આવી હતી અને SDS-PAGE દ્વારા પ્રોટીનની સમકક્ષ માત્રાને ઉકેલવામાં આવી હતી.

પશ્ચિમી બ્લોટિંગ

પીબીએસમાં કોષો ધોવાઇ ગયા હતા અને 2 વખત કેન્દ્રિત લેમ્મલી દ્રાવ્ય બફર (100 એમએમ ટ્રિસ [પીએચ 6.8], 2% એસડીએસ, 0.008% બ્રોમોફેનોલ વાદળી, 2% 2-મર્કેપ્ટોથેનોલ, 26.3% ગ્લિસરિન, અને વાય.0.001%) માં દ્રાવ્ય કરવામાં આવ્યા હતા. સોડિયમ ડોડેસીલ સલ્ફેટ (એસડીએસ) પોલિએક્રાયલામાઇડ જેલ્સ પર લોડ કરતા પહેલા 5 મિનિટ માટે લાયસેટ્સ ઉકાળવામાં આવ્યા હતા. પ્રોટીનને નાઈટ્રોસેલ્યુલોઝ પટલમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવ્યા હતા અને પટલને 1% દૂધ/TBSTમાં 5 કલાક માટે અવરોધિત કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝ 5% દૂધ/TBST માં ભેળવી દેવામાં આવી હતી અને 4 �C તાપમાને રાતોરાત બ્લોટ સાથે ઉકાળવામાં આવી હતી. હોર્સરાડિશ પેરોક્સિડેઝ (HRP)-સંયોજિત ગૌણ એન્ટિબોડીઝ 5% દૂધ/TBST માં ભળે છે. ઉન્નત કેમિલ્યુમિનેસેન્સ સાથે બ્લોટ્સની પ્રક્રિયા કરવામાં આવી હતી અને ઈમેજજે સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને ડેન્સિટોમેટ્રિક ક્વોન્ટિફિકેશન કરવામાં આવ્યા હતા.

સલ્ફોરાફેન એ ક્રુસિફેરસ શાકભાજીમાંથી મેળવેલા ઓર્ગેનોસલ્ફર પદાર્થોના આઇસોથિયોસાયનેટ સંગ્રહમાંથી રસાયણ છે, જેમાં બ્રોકોલી, કોબી, કોબીજ, કાલે અને કોલાર્ડ્સનો સમાવેશ થાય છે. સલ્ફોરાફેન ઉત્પન્ન થાય છે જ્યારે એન્ઝાઇમ માયરોસિનેઝ ગ્લુકોરાફેનિન, ગ્લુકોસિનોલેટને સલ્ફોરાફેનમાં રૂપાંતરિત કરે છે, જેને સલ્ફોરાફેન-ગ્લુકોસિનોલેટ તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે. બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ્સ અને ફૂલકોબીમાં ગ્લુકોરાફેનિનની સૌથી વધુ સાંદ્રતા હોય છે અથવા સલ્ફોરાફેનનો પુરોગામી હોય છે. સંશોધન અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે સલ્ફોરાફેન વિવિધ સ્વાસ્થ્ય સમસ્યાઓને રોકવા માટે માનવ શરીરની એન્ટીઑકિસડન્ટ ક્ષમતાઓને વધારે છે. ડૉ. એલેક્સ જિમેનેઝ ડીસી, CCST ઇનસાઇટ

સલ્ફોરાફેન અને કેન્સર, મૃત્યુદર, વૃદ્ધત્વ, મગજ અને વર્તન, હૃદય રોગ અને વધુ પર તેની અસરો

Isothiocyanates એ કેટલાક સૌથી મહત્વપૂર્ણ છોડ સંયોજનો છે જે તમે તમારા આહારમાં મેળવી શકો છો. આ વિડિયોમાં હું તેમના માટે અત્યાર સુધીનો સૌથી વ્યાપક કેસ બનાવું છું. ટૂંકા ધ્યાન ગાળો? નીચેના ટાઈમ પોઈન્ટ્સમાંથી કોઈ એક પર ક્લિક કરીને તમારા મનપસંદ વિષય પર જાઓ. નીચે સંપૂર્ણ સમયરેખા.

મુખ્ય વિભાગો:

• 00:01:14 - કેન્સર અને મૃત્યુદર
• 00:19:04 - વૃદ્ધત્વ
• 00:26:30 - મગજ અને વર્તન
• 00:38:06 - અંતિમ રીકેપ
• 00:40:27 - માત્રા

સંપૂર્ણ સમયરેખા:

• 00:00:34 - સલ્ફોરાફેનનો પરિચય, વિડીયોનું મુખ્ય ધ્યાન.
• 00:01:14 - ક્રુસિફેરસ શાકભાજીનો વપરાશ અને સર્વ-કારણ મૃત્યુદરમાં ઘટાડો.
• 00:02:12 - પ્રોસ્ટેટ કેન્સરનું જોખમ.
• 00:02:23 - મૂત્રાશયના કેન્સરનું જોખમ.
• 00:02:34 - ધૂમ્રપાન કરનારાઓમાં ફેફસાના કેન્સરનું જોખમ.
• 00:02:48 - સ્તન કેન્સરનું જોખમ.
• 00:03:13 - કાલ્પનિક: જો તમને પહેલેથી જ કેન્સર હોય તો શું? (હસ્તક્ષેપ)
• 00:03:35 - કેન્સર અને મૃત્યુદર એસોસિએટીવ ડેટાને ચલાવતી બુદ્ધિગમ્ય પદ્ધતિ.
• 00:04:38 - સલ્ફોરાફેન અને કેન્સર.
• 00:05:32 - ઉંદરોમાં મૂત્રાશયની ગાંઠના વિકાસ પર બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ અર્કની મજબૂત અસર દર્શાવતા પ્રાણી પુરાવા.
• 00:06:06 - પ્રોસ્ટેટ કેન્સરના દર્દીઓમાં સલ્ફોરાફેનની સીધી પૂરવણીની અસર.
• 00:07:09 - વાસ્તવિક સ્તન પેશીમાં આઇસોથિયોસાયનેટ મેટાબોલાઇટ્સનું જૈવ સંચય.
• 00:08:32 - સ્તન કેન્સર સ્ટેમ કોશિકાઓનું નિષેધ.
• 00:08:53 - ઈતિહાસ પાઠ: પ્રાચીન રોમમાં પણ બ્રાસિકાસ આરોગ્ય ગુણધર્મો ધરાવતા હોવાનું સ્થાપિત કરવામાં આવ્યું હતું.
• 00:09:16 - સલ્ફોરાફેનની કાર્સિનોજેન ઉત્સર્જન (બેન્ઝીન, એક્રોલીન) વધારવાની ક્ષમતા.
• 00:09:51 - એન્ટીઑકિસડન્ટ પ્રતિભાવ તત્વો દ્વારા આનુવંશિક સ્વિચ તરીકે NRF2.
• 00:10:10 - કેવી રીતે NRF2 સક્રિયકરણ ગ્લુટાથિઓન-એસ-કન્જુગેટ્સ દ્વારા કાર્સિનોજેન ઉત્સર્જનને વધારે છે.
• 00:10:34 - બ્રસેલ્સ સ્પ્રાઉટ્સ glutathione-S-transferase વધારે છે અને DNA નુકસાન ઘટાડે છે.
• 00:11:20 - બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ પીણું બેન્ઝીન ઉત્સર્જનમાં 61% વધારો કરે છે.
• 00:13:31 - બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ હોમોજેનેટ ઉપલા વાયુમાર્ગમાં એન્ટીઑકિસડન્ટ ઉત્સેચકોને વધારે છે.
• 00:15:45 - ક્રુસિફેરસ શાકભાજીનું સેવન અને હૃદય રોગથી મૃત્યુદર.
• 00:16:55 - બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ પાવડર રક્ત લિપિડ્સ અને ટાઇપ 2 ડાયાબિટીસના એકંદરે હૃદય રોગના જોખમને સુધારે છે.
• 00:19:04 - વૃદ્ધત્વ વિભાગની શરૂઆત.
• 00:19:21 - સલ્ફોરાફેન-સમૃદ્ધ આહાર ભૃંગના જીવનકાળને 15 થી 30% સુધી (ચોક્કસ પરિસ્થિતિઓમાં) વધારે છે.
• 00:20:34 - આયુષ્ય માટે ઓછી બળતરાનું મહત્વ.
• 00:22:05 – ક્રુસિફેરસ શાકભાજી અને બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ પાવડર માનવોમાં વિવિધ પ્રકારના બળતરા માર્કર્સને ઘટાડે છે.
• 00:23:40 - મિડ-વિડિયો રીકેપ: કેન્સર, વૃદ્ધત્વ વિભાગો
• 00:24:14 - માઉસ અભ્યાસ સૂચવે છે કે સલ્ફોરાફેન વૃદ્ધાવસ્થામાં અનુકૂલનશીલ રોગપ્રતિકારક કાર્યમાં સુધારો કરી શકે છે.
• 00:25:18 - સલ્ફોરાફેન બાલ્ડિંગના માઉસ મોડેલમાં વાળના વિકાસમાં સુધારો કરે છે. 00:26:10 પર ચિત્ર.
• 00:26:30 - મગજ અને વર્તન વિભાગની શરૂઆત.
• 00:27:18 - ઓટીઝમ પર બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ અર્કની અસર.
• 00:27:48 - સ્કિઝોફ્રેનિયા પર ગ્લુકોરાફેનિનની અસર.
• 00:28:17 - હતાશાની ચર્ચાની શરૂઆત (પ્રશંસનીય પદ્ધતિ અને અભ્યાસ).
• 00:31:21 - તણાવ-પ્રેરિત ડિપ્રેશનના 10 વિવિધ મોડલનો ઉપયોગ કરીને માઉસ અભ્યાસ દર્શાવે છે કે સલ્ફોરાફેન ફ્લુઓક્સેટાઇન (પ્રોઝેક) ની જેમ જ અસરકારક છે.
• 00:32:00 - અભ્યાસ દર્શાવે છે કે ઉંદરમાં ગ્લુકોરાફેનિનનું સીધું ઇન્જેશન એ સામાજિક હારના તાણ મોડલમાંથી હતાશાને રોકવા માટે સમાન રીતે અસરકારક છે.
• 00:33:01 - ન્યુરોડિજનરેશન વિભાગની શરૂઆત.
• 00:33:30 - સલ્ફોરાફેન અને અલ્ઝાઈમર રોગ.
• 00:33:44 - સલ્ફોરાફેન અને પાર્કિન્સન રોગ.
• 00:33:51 - સલ્ફોરાફેન અને હંગટિંગ્ટન રોગ.
• 00:34:13 - સલ્ફોરાફેન હીટ શોક પ્રોટીનને વધારે છે.
• 00:34:43 - આઘાતજનક મગજની ઇજાના વિભાગની શરૂઆત.
• 00:35:01 - TBI યાદશક્તિમાં સુધારો કરે પછી તરત જ સલ્ફોરાફેન ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે (માઉસ અભ્યાસ).
• 00:35:55 ​​- સલ્ફોરાફેન અને ન્યુરોનલ પ્લાસ્ટિસિટી.
• 00:36:32 - સલ્ફોરાફેન ઉંદરમાં પ્રકાર II ડાયાબિટીસના મોડેલમાં શીખવામાં સુધારો કરે છે.
• 00:37:19 - સલ્ફોરાફેન અને ડ્યુચેન મસ્ક્યુલર ડિસ્ટ્રોફી.
• 00:37:44 - સ્નાયુ ઉપગ્રહ કોષોમાં માયોસ્ટેટિન અવરોધ (ઇન વિટ્રો).
• 00:38:06 – લેટ-વિડિયો રીકેપ: મૃત્યુદર અને કેન્સર, ડીએનએ નુકસાન, ઓક્સિડેટીવ તણાવ અને બળતરા, બેન્ઝીન ઉત્સર્જન, કાર્ડિયોવેસ્ક્યુલર રોગ, પ્રકાર II ડાયાબિટીસ, મગજ પર અસરો (ડિપ્રેશન, ઓટીઝમ, સ્કિઝોફ્રેનિયા, ન્યુરોડીજનરેશન), NRF2 માર્ગ.
• 00:40:27 - બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ્સ અથવા સલ્ફોરાફેનનો ડોઝ શોધવા અંગેના વિચારો.
• 00:41:01 – ઘરે અંકુર ફૂટવાની ટુચકાઓ.
• 00:43:14 - રસોઈ તાપમાન અને સલ્ફોરાફેન પ્રવૃત્તિ પર.
• 00:43:45 - ગ્લુકોરાફેનિનમાંથી સલ્ફોરાફેનનું આંતરડાના બેક્ટેરિયાનું રૂપાંતર.
• 00:44:24 - શાકભાજીમાંથી સક્રિય માયરોસિનેઝ સાથે જોડવામાં આવે ત્યારે પૂરક વધુ સારી રીતે કામ કરે છે.
• 00:44:56 - રાંધવાની તકનીકો અને ક્રુસિફેરસ શાકભાજી.
• 00:46:06 - ગોઇટ્રોજન તરીકે આઇસોથિયોસાયનેટ્સ.

સ્વીકાર

Sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231716302750

સલ્ફોરાફેન કેવી રીતે ઉત્પન્ન થાય છે?

હીટિંગ એપિથિયોસ્પેસિફાયર પ્રોટીન પ્રવૃત્તિ ઘટાડે છે અને બ્રોકોલીમાં સલ્ફોરાફેનની રચનામાં વધારો કરે છે

અમૂર્ત

સલ્ફોરાફેન, બ્રોકોલીમાંથી એક આઇસોથિયોસાયનેટ, સૌથી શક્તિશાળી ખોરાકમાંથી મેળવેલા એન્ટિકાર્સિનોજેન્સમાંનું એક છે. આ સંયોજન અકબંધ શાકભાજીમાં હાજર હોતું નથી, બલ્કે બ્રોકોલીની પેશીને કચડી નાખવામાં આવે છે અથવા ચાવવામાં આવે છે ત્યારે તે તેના ગ્લુકોસિનોલેટ પુરોગામી, ગ્લુકોરાફેનિન, માયરોસિનેઝ, થિયોગ્લુકોસિડેઝ એન્ઝાઇમની ક્રિયા દ્વારા રચાય છે. જો કે, સંખ્યાબંધ અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે ગ્લુકોરાફેનિનમાંથી સલ્ફોરાફેન ઉપજ ઓછી છે, અને જ્યારે ઓરડાના તાપમાને છોડની પેશીઓને કચડી નાખવામાં આવે છે ત્યારે બિન-જૈવ સક્રિય નાઇટ્રિલ એનાલોગ, સલ્ફોરાફેન નાઇટ્રિલ પ્રાથમિક હાઇડ્રોલિસિસ ઉત્પાદન છે. તાજેતરના પુરાવા સૂચવે છે કે અરેબિડોપ્સિસમાં, ગ્લુકોસિનોલેટ્સમાંથી નાઈટ્રિલની રચના ગરમી-સંવેદનશીલ પ્રોટીન, એપિથિઓસ્પેસિફાયર પ્રોટીન (ESP) દ્વારા નિયંત્રિત થાય છે, જે માયરોસિનેઝના બિન-ઉત્પ્રેરક કોફેક્ટર છે. અમારો ઉદ્દેશ્યો સલ્ફોરાફેન અને સલ્ફોરાફેન નાઈટ્રિલની રચના પર બ્રોકોલીના ફલોરેટ્સ અને સ્પ્રાઉટ્સને ગરમ કરવાની અસરોની તપાસ કરવાનો હતો, તે નક્કી કરવા માટે કે બ્રોકોલીમાં ESP પ્રવૃત્તિ છે કે નહીં, પછી ESP પ્રવૃત્તિ, સલ્ફોરાફેન સામગ્રી અને જૈવ સક્રિયતામાં ગરમી-આધારિત ફેરફારોને સહસંબંધિત કરવા, જેમ કે ઇન્ડક્શન દ્વારા માપવામાં આવે છે. સેલ કલ્ચરમાં ફેઝ II ડિટોક્સિફિકેશન એન્ઝાઇમ ક્વિનોન રિડક્ટેઝ (QR). તાજા બ્રોકોલી ફલોરેટ્સ અથવા બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ્સને એકરૂપતા પહેલા 60 ડિગ્રી સેલ્સિયસ તાપમાને ગરમ કરવાથી એક સાથે સલ્ફોરાફેનનું નિર્માણ વધ્યું અને સલ્ફોરાફેન નાઈટ્રિલની રચનામાં ઘટાડો થયો. સલ્ફોરાફેન નાઈટ્રિલ રચનામાં ઘટાડો સાથે સમાંતર ESP પ્રવૃત્તિમાં નોંધપાત્ર નુકસાન. 70 �C અને તેથી વધુ તાપમાને ગરમ થવાથી બ્રોકોલીના ફૂલોમાં બંને ઉત્પાદનોની રચનામાં ઘટાડો થયો, પરંતુ બ્રોકોલી સ્પ્રાઉટ્સમાં નહીં. સંસ્કારી માઉસ હેપેટોમા હેપા એલસીએલસી7 કોષોમાં સલ્ફોરાફેન રચનામાં સમાંતર વધારો થાય છે.

બ્રોકોલી ફલોરેટ્સ અને સ્પ્રાઉટ્સને 60 ડિગ્રી સેલ્સિયસ સુધી પ્રી-હીટિંગ કર્યા પછી વનસ્પતિ પેશીના અર્કમાં સલ્ફોરાફેન (SF) ની માયરોસિનેઝ-ઉત્પ્રેરિત રચનામાં નોંધપાત્ર વધારો થયો છે. આ સલ્ફોરાફેન નાઇટ્રિલ (SF નાઇટ્રિલ) ની રચના અને એપિથિયોસ્પેસિફાયર પ્રોટીન (ESP) પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો સાથે સંકળાયેલું હતું.

કીવર્ડ્સ: બ્રોકોલી, બ્રાસિકા ઓલેરેસીઆ, ક્રુસિફેરા, કેન્સર, એન્ટીકાર્સિનોજેન, સલ્ફોરાફેન, સલ્ફોરાફેન નાઈટ્રિલ, એપિથિયોસ્પેસિફાયર પ્રોટીન, ક્વિનોન રીડક્ટેઝ

નિષ્કર્ષમાં, સલ્ફોરાફેન એ ફાયટોકેમિકલ છે જે બ્રોકોલી અને અન્ય ક્રુસિફેરસ શાકભાજીમાં જોવા મળે છે. આંતરિક અને બાહ્ય બંને પરિબળોને કારણે ઓક્સિડન્ટ્સની અનિયંત્રિત માત્રા માનવ શરીરમાં ઓક્સિડેટીવ તણાવનું કારણ બની શકે છે જે આખરે વિવિધ સ્વાસ્થ્ય સમસ્યાઓ તરફ દોરી શકે છે. સલ્ફોરાફેન Nrf2 ના ઉત્પાદનને સક્રિય કરી શકે છે, જે એક ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળ છે જે ઓક્સિડન્ટ્સ પ્રત્યે સેલના પ્રતિભાવને નિયંત્રિત કરતા રક્ષણાત્મક એન્ટીઑકિસડન્ટ મિકેનિઝમ્સને નિયંત્રિત કરવામાં મદદ કરે છે. અમારી માહિતીનો અવકાશ શિરોપ્રેક્ટિક અને કરોડરજ્જુના સ્વાસ્થ્ય સમસ્યાઓ સુધી મર્યાદિત છે. વિષયની ચર્ચા કરવા માટે, કૃપા કરીને ડૉ. જીમેનેઝને પૂછો અથવા અમારો સંપર્ક કરો915-850-0900 .

ડૉ. એલેક્સ જિમેનેઝ દ્વારા ક્યુરેટેડ

આમાંથી સંદર્ભિત: Sciencedirect.com

વધારાના વિષયની ચર્ચા: તીવ્ર પીઠનો દુખાવો

પીઠનો દુખાવોવિકલાંગતાના સૌથી પ્રચલિત કારણોમાંનું એક અને કામના દિવસો ચૂકી જવાના દિવસો છે. પીઠનો દુખાવો એ ડૉક્ટરની ઑફિસની મુલાકાત માટેના બીજા સૌથી સામાન્ય કારણને આભારી છે, જે ફક્ત ઉપલા-શ્વસન માર્ગના ચેપથી વધુ છે. આશરે 80 ટકા વસ્તી તેમના સમગ્ર જીવનમાં ઓછામાં ઓછા એક વખત પીઠનો દુખાવો અનુભવશે. કરોડરજ્જુ એ હાડકાં, સાંધા, અસ્થિબંધન અને સ્નાયુઓ, અન્ય નરમ પેશીઓની વચ્ચે બનેલી જટિલ રચના છે. આને કારણે, ઇજાઓ અને/અથવા વિકટ પરિસ્થિતિ, જેમ કે�હર્નિયેટ ડિસ્ક, આખરે પીઠના દુખાવાના લક્ષણો તરફ દોરી શકે છે. રમતગમતની ઇજાઓ અથવા ઓટોમોબાઇલ અકસ્માતની ઇજાઓ પીઠના દુખાવા માટેનું સૌથી વારંવારનું કારણ છે, જો કે, કેટલીકવાર સરળ હલનચલન પીડાદાયક પરિણામો લાવી શકે છે. સદનસીબે, વૈકલ્પિક સારવાર વિકલ્પો, જેમ કે ચિરોપ્રેક્ટિક સંભાળ, કરોડરજ્જુના ગોઠવણો અને મેન્યુઅલ મેનિપ્યુલેશન્સના ઉપયોગ દ્વારા પીઠનો દુખાવો ઓછો કરવામાં મદદ કરી શકે છે, આખરે પીડા રાહતમાં સુધારો કરે છે.

EXTRA EXTRA | મહત્વપૂર્ણ વિષય: ભલામણ કરેલ અલ પાસો, TX શિરોપ્રેક્ટર

***